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超惰性固定相对生物分子反相HPLC的益处介绍Ⅱ - 优化选择性
点击次数:122 发布时间:2019-05-22

ACE色谱柱超惰性固定相对生物分子反相HPLC的益处

 

优化选择性
TFA和其他流动相添加剂与肽类和蛋白质的复合能力可用于调节选择性并改善分离度。如下图所示,将TFA浓度从0.1%降低至0.01%可使血管紧张素II和III实现分离。

在超惰性ACE色谱柱的情况下,随着分离度的显著改善,峰形和灵敏度保持恒定。在Vydac色谱柱(填充有更具活性的固定相)的情况下,峰形被严重破坏。

 

选择性,随TFA的浓度而变化

色谱柱:250 x 4.6mm, 5μm C18 300Å
流动相:A:TFA(溶于水中)B: 80%TFA(溶于乙腈中),20%TFA(溶于水中),(按照上述说明为%TFA),15分钟内25%-40%B
流速:1.0 mL/min

检测:UV 215nm
化合物:

1.血管紧张素II
2.血管紧张素III
3.血管紧张素I

ACE 5 C18-300
超惰性硅胶

Vydac 218TP
低纯度“活性”硅胶


通过降低TFA浓度来改善分离度。由低品质硅胶制成的色谱柱显示其性能降低。

备注:比较性分离物不代表所有应用。

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