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超惰性固定相对生物分子反相HPLC的益处介绍Ⅲ - 增加PH范围
点击次数:101 发布时间:2019-05-22

ACE色谱柱超惰性固定相对生物分子反相HPLC的益处

增加PH范围
大多数生物分子是带电荷的。

肽类和蛋白质带有多种电荷。从小分子的经验来看,已流动相pH可以成为改变保留值并因此而优化带电化合物分离度的有力工具。

肽类也是如此。

再次以使用血管紧张素II和III作为实例,下图显示在pH=2的条件下,ACE超惰性色谱柱或填充有更具活性固定相的色谱柱上这两种肽未实现分离。

通过将pH增加至7,这两种色谱柱则均能提供良好的分离度。

然而,尽管ACE超惰性色谱柱保持了良好的峰形,但填充低纯度硅胶的色谱柱显示其峰形较差和性能损失。

在极性化合物的许多反相应用中观察到了这种现象。

在中等pH值时,硅醇相互作用更为普遍,因此峰拖尾在活性固定相上变得更加明显。

 

流动相pH对分离度的影响

色谱柱:250 x 4.6mm, 5μm C18 300Å
流动相:

pH 2 A:0.1% TFA(溶于水中) B: 0.1% TFA(溶于乙腈中)
pH 7 A: 10mM NH4OAc(溶于水中) B: 乙腈 15分钟内25%-40% B
流速:1.0 mL/min

检测:UV 215nm
化合物:

1.血管紧张素II
2.血管紧张素III
3.血管紧张素I

ACE 5 C18-300
超惰性硅胶

Vydac 218TP
低纯度“活性”硅胶

调节流动相的pH是提高选择性的有力工具。只有基于超纯硅胶的色谱柱才能在更高的pH值下保持性能。

备注:比较性分离物不代表所有应用。

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